Cent Eur J Public Health 2004, 12(1):3-5

Rapid Detection of Bacterial Atypical Pneumonia Agents by Multiplex PCR

Pınar A., Bozdemir N., Kocagöz T., Alaçam R.
Hacettepe University, Faculty of Medicine, Department of Microbiology and Clinical Microbiology, Ankara, Turkey

Approximately one third of community acquired pneumonia cases are caused by atypical pneumonia agents, Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, and Chlamydophila pneumoniae (formerly Chlamydia pneumoniae). The laboratory diagnosis of these organisms is difficult and time-consuming by conventional microbiological techniques. Polymerase chain reaction (PCR) is one of the important tools which can circumvent this problem. A multiplex PCR assay was developed to achieve the diagnosis of these three organisms in a single tube. Primers used in PCR were selected in a way that they amplified different length DNA fragments from different agents but they all worked at the same amplification conditions. Therefore the organisms could be diagnosed according to the length of amplified products by agarose gel electrophoresis without using any hybridization probes. After development of the multiplex PCR method, totally 309 clinical samples which were sent to our laboratory for single-agent PCR, were also evaluated by this technique. The results showed that the multiplex PCR assay is a sensitive, useful, cheap, and rapid diagnostic tool for the management of pneumonia patients.

Klíčová slova: Chlamydophila pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, multiplex PCR, pneumonia

Vloženo: 5. březen 2003; Revidováno: 11. listopad 2003; Přijato: 11. listopad 2003; Zveřejněno: 1. březen 2004  Zobrazit citaci

ACS AIP APA ASA Harvard Chicago Chicago Notes IEEE ISO690 MLA NLM Turabian Vancouver
Pınar A, Bozdemir N, Kocagöz T, Alaçam R. Rapid Detection of Bacterial Atypical Pneumonia Agents by Multiplex PCR. Cent Eur J Public Health. 2004;12(1):3-5. PubMed PMID: 15068198.
Stáhnout citaci

Reference

  1. HinmanAR: Global progress in infectious diseases control. Vaccine 1998; 16: 1116-1121. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  2. Gröndahl B, Puppe W, Hoppe A, Kühne I, Weigl JAI, Schmitt HJ: Rapid identification of nine microorganisms causing acute respiratory tract infections by single-tube multiplex reverse transcription-PCR: Feasibility study. J Clin Microbiol 1999; 37: 1-7. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  3. Saiki RK: Amplification of genomic DNA. In: Innis MA, Gelfand DH, Sninsky JJ, White TJ, eds. PCR protocols: a guide to methods and applications. New York, Academic Press, Inc., 1990: 13-20. Přejít k původnímu zdroji...
  4. Jaulhac B, Nowicki M, Bornstein N, Meunier O, Prevost G, Piemont Y, Fleurette J, Monteil H: Detection of Legionella spp. in bronchoalveolar lavage fluids by DNA amplification. J Clin Microbiol 1992; 30: 920924. Přejít k původnímu zdroji...
  5. Tjhie JH, van Kuppeveld FJ, Roosendaal R, Melchers WJ, Gordijn R, MacLaren DM, Walboomers JM, Meijer CJ, van den Brule AJ: Direct PCR enables detection of Mycoplasma pneumoniae in patients with respiratory tract infections. J Clin Microbiol 1994; 32: 11-16. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  6. Campbell LA, Perez Melgosa M, Hamilton DJ, Kuo CC, Graystone JT: Detection of Chlamydia pneumoniae by polymerase chain reaction. J Clin Microbiol 1992; 30: 434-439. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  7. Sambrook J, Russell DW, Irwin N, Janssen KA: Rapid isolation of mammalian DNA. In: Sambrook J, Russell DW, eds. Molecular Cloning, A Laboratory Manual. New York, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001; 6.28-6.30.
  8. Mahbubani MH, Bej AK, Miller R, Haff L, DiCaesare J, Atlas RM: Detection of Legionella with polymerase chain reaction and gene probe methods. Mol Cell Probes 1990; 4: 175-187. Přejít k původnímu zdroji...
  9. Foy HM: Infections caused by Mycoplasma pneumoniae and possible carrier state in different populations of patients. Clin Infect Dis, 1993; 17(Suppl. 1): S37-S46. Přejít k původnímu zdroji...
  10. Clyde WA, Jr: Clinical overview of typical Mycoplasma pneumoniae infections. Clin Infect Dis 1993; 17(Suppl. 1): S32-S36. Přejít k původnímu zdroji...
  11. Ieven M, Demey H, Ursi D, van Goethem G, Cras P, Goossens H: Fatal encephalitis caused by Mycoplasma pneumoniae diagnosed by the polymerase chain reaction. Clin Infect Dis 1998; 27: 1552-1553. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  12. Kok TW, Varkanis G, Marmion BP, Martin J, Esterman A: Laboratory diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection. 1. Direct detection of antigen in respiratory exudates by enzyme immunoassay. Epidemiol Infect 1988; 101: 669-684. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  13. Harris R, Marmion BP, Varkanis, Kok GT, Lunn B, Martin J: Laboratory diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection. 2. Comparison of methods for the direct detection of specific antigen or nucleic acid sequences in respiratory exudates. Epidemiol Infect 1988; 101: 685-694. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  14. de Barbeyrac B, Bernet-Poggi C, Fébrer F, Renaudin H, Dupon M, Bébéar C: Detection of Mycoplasma pneumoniae and Mycoplasma genitalium in clinical samples by polymerase chain reaction. Clin Infect Dis 1993; 17(Suppl. 1): S83-S89. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  15. Ieven M, Ursi D, Van Bever H, Quint W, Niesters HGM, Goossens H: Detection of Mycoplasma pneumoniae by two polymerase chain reactions and role of M. pneumoniae in acute respiratory tract infections in pediatric patients. J Infect Dis 1996; 173: 1445-1452. Přejít k původnímu zdroji...
  16. Kessler HH, Dodge DE, Pierer K, Young KKY, Liao Y, Santner BI, Eber E, Roeger MG, Stuenzer D, Sixl-Voigt B, Marth E: Rapid detection of Mycoplasma pneumoniae by an assay based on PCR and probe hybridization in a nonradioactive microwell plate format. J Clin Microbiol 1997; 35: 1592-1594. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  17. Boman J, Gaydos CA, Quinn TC: Molecular diagnosis of Chlamydia pneumoniae infection. J Clin Microbiol 1999; 37: 3791-3799. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  18. Gaydos CA, QuinnTC, Eiden JJ: Identification of Chlamydia pneumoniae by DNAamplification of the 16S rRNAgene. J Clin Microbiol 1992; 30: 796-800. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  19. Messmer TO, Skelton SK, Moroney JF, Daugharty H, Fields BS:Application of a nested, multiplex PCR to psittacosis outbreaks. J Clin Microbiol 1997; 35: 2043-2046. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  20. Madico G, Quinn TC, Boman J, Gaydos CA: Touchdown enzyme time release-PCR for detection and identification of Chlamydia trachomatis, C. pneumoniae, and C. psittaci using the 16S and 16S-23S spacer rRNA genes. J Clin Microbiol 2000; 38: 1085-1093. Přejít k původnímu zdroji... Přejít na PubMed...
  21. Tong CY, Sillis M: Detection of Chlamydia pneumoniae and Chlamydia psittaci in sputum samples by PCR. J Clin Pathol 1993; 46: 313-317. Přejít k původnímu zdroji...